date:2025-04-10 16:27:58
趋化性分析旨在分析某一细胞类型是否会直接朝着特定的趋化因子定向迁移。由于趋化性在癌症发展和免疫细胞浸润过程中尤为重要,因此在趋化性分析中常用的细胞类型为癌细胞和免疫细胞。
趋化性分析可用于研究:
·目的基因敲除、敲低或过表达后细胞的趋化行为
·物质的趋化潜力
·趋化抑制剂和增强剂的作用
·区分趋化性和化学诱导运动(增强的细胞迁移)
·趋化过程中的细胞信号传导
·趋化过程中细胞骨架的变化
在2D表面迁移的HT-1080 LifeAct-TagGFP2趋化性细胞
2D与3D趋化性分析
许多细胞自然生长于3D环境中。在体外培养时,细胞附着在平坦的2D表面上,其行为可能与处于3D凝胶基质中时有所不同。在很多情况下,3D环境更接近体内真实情况,因此在设计趋化性实验时需要考虑到这一点。
使用µ-Slide Chemotaxis趋化载玻片时,由于凝胶结构不妨碍扩散,可轻松在水基凝胶(如I型胶原凝胶和Matrigel)中建立趋化梯度。
显微成像示意图:2D表面贴壁的HT-1080癌细胞(左)
嵌入3D I型胶原凝胶的HT-1080癌细胞(右)
用于趋化性分析的腔室
已经开发了几种具有不同特性的腔室来进行趋化性分析:
·µ-Slide Chemotaxis趋化载玻片
·Boyden Chamber(Transwell迁移实验)
·齐格蒙德小室(Zigmond Chamber)
·邓恩小室(Dunn Chamber)
ibidi µ-Slide Chemotaxis趋化载玻片
·在ibidi µ-Slide Chemotaxis趋化载玻片中,细胞在连接两个大储液池的中央通道内迁移并可被实时观察到。
·可建立长期稳定的线性梯度
·实验起始时细胞分布均匀
·适用于倒置显微镜活细胞成像
适用于:
·2D和3D分析
·快速和慢速迁移的细胞
·贴壁和非贴壁细胞
实验原理:细胞可培养于3D凝胶基质或2D表面(图示为3D凝胶中迁移细胞)
µ-Slide Chemotaxis的开发旨在研究快速或慢速迁移的、非贴壁或贴壁细胞在2D表面或3D凝胶基质中的趋化行为。可以在超过48小时的时间内观察到细胞在稳定线性浓度分布中的迁移。由于梯度可以快速建立,因此也可以测量快速迁移反应(在不到30分钟内发生)。
使用µ-Slide Chemotaxis可以对各种细胞类型(如内皮细胞、成纤维细胞、癌细胞和免疫细胞)的迁移行为进行详细而明确的分析。
参考文献:
Zengel P, et al. (2011) μ-Slide Chemotaxis: a new chamber for long-term chemotaxis studies. BMC Cell Biol 12:21. 10.1186/1471-2121-12-21.
Biswenger V, et al. (2018) Characterization of EGF-guided MDA-MB-231 cell chemotaxis in vitro using a physiological and highly sensitive assay system. PLoS One 13(9):e0203040. 10.1371/journal.pone.0203040.
Boyden Chamber(Transwell迁移实验)
·细胞从滤膜或多孔膜的一侧迁移到另一侧,也称为Transwell细胞迁移分析
·终点分析:在分析Transwell迁移分析时,在膜的背面计数迁移细胞,因此无法分析细胞路径
·陡峭的梯度
·起始细胞分布不均;细胞仅位于膜的一侧
Zigmond Chamber
·细胞在连接两储液池的桥接区域玻璃盖片上迁移生长和迁移
·生成线性梯度但稳定性差
·起始细胞分布均匀
·需正置显微镜进行延时成像
Dunn Chamber
·与Zigmond腔室相似
·生成线性梯度但稳定性差
·起始细胞分布均匀
·需正置显微镜进行延时成像
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