1.哪些特定应用使用µ-Slide VI ^0.1？

　　如果实验中的细胞数量有限(例如当使用原代小鼠细胞时)，或者使用最少量的试剂做进行免疫荧光，建议使用µ-Slide VI ^0.1 。对于灌注实验，µ-Slide VI ^0.1 会产生最高水平的剪切应力。

　　2. µ-Slide内的流型是Y型湍流吗？

　　不是，当使用标准流速和水性介质时，在小通道中无法真正实现湍流特性。无量纲雷诺数(Re)用于表征不同的流型。层流发生在低雷诺数，而湍流发生在高雷诺数。表明管道和生物容器中层流的临界雷诺数是Re=2000。雷诺数超过Re 4000，最有可能代表湍流。即使在 µ-Slide y-shaped中流速非常高（60毫升/分钟），雷诺数仍非常低，约为Re=200，表明层流。

　　3.多大的剪切应力适合于滚动和粘附分析？

　　在滚动和粘附分析中，应该使用与内皮细胞层的标准流动调节相同的参数。有两件事需要考虑: 首先，在进行滚动和粘附实验之前，内皮细胞层应该进行几天的流动调节。这个阶段的剪切应力可能不同于在滚动和粘附期间施加的剪切应力。其次，在粘附试验中，灌注培养基的速度也起作用。可能需要改变剪切应力。此外，有必要测试最佳流速/剪切应力。

　　4.为什么我的细胞在流动条件下没有拉长？

　　内皮细胞的生理形状在不同类型的血管中差异很大。并非所有类型的内皮细胞在其生理环境中都被拉长。

　　例如，HUVEC在血流的第一阶段伸长。为了覆盖整个表面，细胞通过在流动方向上伸长来增加它们的表面。在此流动期之后，细胞层生长成定向鹅卵石图案，不再显示显著的伸长。

　　5.在进行分析之前，应该对细胞层施加多长时间的剪切应力？

　　细胞对机械剪切应力的适应性反应可长达数天。因此，根据您正在研究的标记，可能有必要在分析前对细胞层进行长达几天的调节。我们建议在长期实验中测试感兴趣的参数，以确定最佳的测量时间点。

　　6.应该对内皮细胞施加多大的剪切力？

　　生理剪切应力取决于感兴趣的组织和血管类型。根据文献，人体内的生理剪切应力值在0至60dyn/cm²之间变化。在开始实验之前，确定适用于所用细胞类型的相关剪切应力范围至关重要。有关剪切应力对细胞影响的更多信息，请点击查看这里（这是个链接2023-03-10发布的公众号）。

　　7.如何增加流动分析中的细胞数量？

　　将通道载玻片串联到一个灌流装置/流体单元中，可以轻松地增加流式检测中细胞的数量。应用说明书25（这是个链接2022-07-15发布的公众号）提供了连接多个通道载玻片到一个流体单元的详细方案。 此外，将细胞播种到通道底部和顶部，也可以增加通道中的细胞数量。

　　8.在开始流动之前，细胞应该附着多久？

　　在流动开始之前，细胞必须紧密附着在通道载玻片底部。附着时间取决于细胞类型、培养基添加物和表面。例如，在胶原涂层表面上使用HUVEC时，附着时间只需半小时。之后，就可以施加剪切应力。为了使细胞有机会适应新的环境条件，建议逐步增加剪切应力。关于HUVEC的详细信息请参阅应用说明13（这是个链接2022-08-24发布的公众号。 

　　9.硅珠如何再生？

　　将硅胶珠加热即可轻松再生。请按照ibidi泵系统的说明书中的方案进行回收。

　　10.灌注装置多久可以重复使用一次？

　　我们不建议重复使用灌注组件。每次实验都使用一个新的灌注装置，可获得最可复制和最可靠的结果。您可以在ibidi泵系统说明书中找到有关灭菌和清洁的其他信息。 

　　11.如何确保细胞获得孵化后的空气？

　　ibidi泵系统的设置确保来自培养箱内部的具有正确CO2浓度的无菌空气驱动灌注。有关详细说明，请参见ibidi泵系统的说明书。 

　　12.如何计算通道载玻片中悬浮细胞的剪切应力？

　　在通道中通过液体时，壁面摩擦会导致流动速度呈抛物线形。通道中心的流速将比壁面快。剪切应力仅在通道或管道的壁面上发生。因此，只有附着在通道壁/底部的细胞才会经历剪切应力。通道中央的悬浮细胞将经历不同的流速，与靠近通道壁的细胞不同。因此，对于悬浮细胞，剪切速率是需要考虑的相关因素，而不是剪切应力。