1.介绍

　　ibidi泵系统/流体剪切力系统是专为灌注条件下的长期细胞调节而设计。标准方法是将一个载玻片连接到一个灌注装置。在某些情况下，增加载玻片（细胞）的数量可能是有用的。例如，当计划进行各种染色时，或者如果细胞数量对于后续的应用（如FACS）不够时。

　　本应用是一个循序渐进依次连接µ-Slide VI0.4六通道载玻片的实验方案。

　　重要提示！

　　串联的通道承受着几乎相同的流速，因此剪切应力也几乎相同。

　　我们强力建议串联通道载玻片，而不是并联！

　　我们建议按所述方式连接不要超过两个µ-Slide VI0.4 六通道载玻片

　　2.材料

　　对于设置，需要以下材料(无菌):

　　* 串联连接管(ibidi #10830)，5 pieces

　　* 细胞培养基

　　* 接种了细胞的ibidi µ-Slide VI 0.4

　　* 灌流管

　　* 1 ml注射器

　　* 软管夹

　　* 移液吸头

　　重要提示！

　　将串联连接管、细胞培养基、通道载玻片和灌注装置在培养箱中平衡一整晚!

　　本方案的所有步骤都应在无菌条件下完成!

　　3.准备工作

　　整个设置相当于只有一个通道的标准实验。 唯一的区别是，在将整个组件连接到Perfusion Set之前，先将多个通道串行连接起来。

　　3.1.接种细胞

　　像往常一样在µ-Slide VI 0.4的通道中接种细胞。如果需要进一步的静态培养，让细胞附着并在附着后用60µl无细胞培养基填充储液池。详细说明见“使用ibidi流体剪切力系统培养内皮细胞实验方法汇总”。细胞贴壁后，就可以进行载玻片的串连了。

　　3.2.泵设置

　　按照“使用ibidi流体剪切力系统培养内皮细胞实验方法汇总”中的说明准备泵的设置。向灌流管的储液池中各注入5ml平衡介质，并以中压(约50mbar)运行泵，去除气泡。

　　重要提示！

　　将公鲁尔接头连接到母鲁尔接头时，务必小心不要带进气泡。

　　尽可能快地工作，以避免载玻片和细胞冷凝。整个过程必须在10分钟内完成。

　　4.串联连接

　　通道的串联连接是在细胞贴壁后和将载玻片连接到灌注管之前完成。

　　按照第3部分的描述准备载玻片，接种细胞并贴壁        如图所示，将五个串行连接管连接到Luer端口

　　用无细胞培养基填充注液孔，直到所有注液孔完全充满    在此步骤中，注意注液孔底部不能有气泡

　　注意不能在注液孔中留有气泡

　　用1ml的无菌注射器吸满培养基，小心插入如图的孔中，不要引入气泡。

　　小心慢慢注入培养基，直到第一个串联管有培养基微微冒出

　　小心的将串联管弯过来，插入相邻的Luer端口中。不要产生气泡。

　　继续推动注射器，直到第二根串联管也被充满，继续推动注射器充满下一根串联管。

　　重复上面的操作，继续充满所有的通道和串联管。

　　将所有的串联管连接好后，将加满液体排除气泡的灌流管用软管夹夹住。

　　从灌流管的母鲁尔锁定耦合器中拔出公鲁尔接头，并将其插入载玻片上末尾一个Luer端口中。在慢慢抽出注射器，用新鲜的培养基填满Luer端口并去除气泡

　　从灌流管的母鲁尔锁定耦合器中拔出第二个公鲁尔接头，并将其插入载玻片上另一端末尾的Luer端口

　　设置完成，可开始启动实验。别忘了取下软管夹！

　　串联灌流系统搭建完成。

　　5.调整流速

　　软件中无法预见多个通道载玻片的设置。需要调整泵的参数以适应新的要求。作为指南您可以在软件中选定正在使用是µ-Slide VI0.4通道载玻片。由此产生的流速(以及剪切应力)将低于在单通道的应用中。用所需的剪切应力启动一个循环，手动测量流速(ibidi Pump Instructions, page 40（可联系我们索要电子版文档）)。然后进入重新校准对话框，输入计算的（软件给定的流速）和测量的流速。