ibidi的伤口愈合系列产品，一直以来受到各个领域专家的一致好评。在此我们收集了研究者的一些疑问，今天我们就这些问题进行简答的解答。ibidi伤口愈合插件设计精巧，操作简单，标准化的数据分析方法恰恰弥补了传统实验方法的不足。

　问题一：要放多少细胞？

　经常会有老师对放多少细胞产生疑问，对于细胞量来说，我们的目的是要在插件的培养孔里面形成单层的细胞。细胞密度既不能过低，也不能过高。以35mm培养皿为例，通常采用下面的步骤：

　1. 准备5 x 105 cells/ml的细胞悬液.  105

　2. 每孔加入 70 µl / 100 µl细胞悬液 (2孔或3孔插件每孔种35,000个细胞，4孔伤口愈合插件每孔种55,000个细胞）。

　3. 37 °C孵育24小时。

　4. 用灭菌镊子移除伤口愈合插件。

　5. 在35mm培养皿内加入1ml新鲜培养基。

　6. 放于倒置显微镜载物台上，以4X-20X物镜采集初始图片，并按实验节点设置在同一位置采集图片。

　问题二：插件尺寸多大？能放进6/24孔板么？能产生的划痕宽度是多少？

　Ibidi当前有三种伤口愈合插件：2孔3孔和4孔插件，其中2孔和3孔插件单孔容积为70μl，尺寸分别为8.4 mm x 8.4 mm和 12.15 mm x 8.4 mm。单孔的细胞生长面积均为0.22cm2。4孔的单孔容积为110μl，插件的直径为17mm，每孔的生长面积为0.35cm2，三种插件均能放入六孔板中，2孔伤口愈合插件也可放进24孔板。所有的插件均能产生500μm的划痕。此外，4孔插件除了能产生四个500μm的划痕外，还包括一个1mm的中间划痕。

　问题三：只买插件能放在日常的培养耗材中么？对底部有什么要求？能用于蛋白包被过的表面么？自己放会不会漏液？

　传统方法

　vs

　ibidi伤口愈合插件

　Ibidi的三种伤口愈合插件均有只提供单插件的包装，需要研究人员自己准备培养耗材。如果对成像无过高的要求，均可以使用日常的培养耗材，Ibidi插件采用硅胶材质，底部为静电吸附，无胶水，只需要底部是平整干净即可。如果是蛋白包被的表面，则需要蛋白包被层完全干燥后，才能将插件放上面，插件不能贴在潮湿的表面，具体的包被建议先做预实验测试一下。在放入插件后，可以用灭菌镊子轻轻压插件的四壁，确保插件与底部完全贴合。

　问题四：ibidi插件能够反复使用么？

　尽管ibidi插件的材质可以湿热灭菌并且对乙醇稳定，但是，ibidi并不建议重复使用ibidi插件，由于是静电吸附的原理，重复操作对底部的影响不可控。有可能会发生漏液等现象，影响实验的重复性。ibidi没有重复使用的经验，如果研究人员一定要重复使用，可能需要研究人员自己测试一下。

　问题五：该如何采集图片？需要采集同一培养皿的同一划痕区域么？

　由于划痕实验的本质就是观测细胞迁移的速率。一般情况下需要根据实验设计几个图像采集实验时间点，之后尽量在同一区域采集图像。比如下图采集为0h，10h，16h，这样获得的结果对比一目了然。